PCR防污染实验室整体装修设计

  PCR技术是通过对基因的选择性片段进行体外高效扩增，实现目的基因的检测。荧光探针定量PCR（FQ-PCR）是一种新的基因定量检测技术，是在常规PCR基础上加入荧光标记探针，巧妙地把核酸扩增（PCR）与光谱技术结合在一起，从而实现了对目的基因的准确定量检测，正发展成为临床实验诊断的常规技术。 防污染是PCR实验室设计、建造、管理的重点。

  PCR实验室污染的原因主要来自于几方面：标本间交叉污染、PCR试剂的污染、PCR扩增产物的污染等、气溶胶污染等。

  防污染措施主要包括：

  一、科学合理的实验室设计。将试剂准备、样品制备、扩增、产物分析进行分区，特别注意样品制备及产物分析与其它区严格分离，并设置缓冲区，通过气流自动控制，确保实验室空气流向试剂准备→样品制备→扩增→产物分析区。其工作服、实验用品及吸样枪应专用，实验前用紫外线消毒以破坏残留的DNA或RNA。

  二、吸样枪。吸样枪污染是一个值得注意的问题，由于操作时不慎将样品或模板核酸吸入枪内或粘上枪头是一个严重的污染源，因而加样或吸取模板核酸时要十分小心，吸样要慢，吸样时尽量一次性完成，忌多次抽吸，以免交叉污染或产生气溶胶污染。

  三、预混和分装PcR试剂。所有的PCR试剂都应小量分装，如有可能，PCR反应液应预先配制好，然后小量分装并-20℃保存，以减少重复加样次数,避免污染机会。另外，PCR试剂、PCR反应液应与样品及PCR产物分开保存，不应放于同一冰盒或同一冰箱。

 四、防止操作人员污染。使用一次性手套、吸头、小离心管应一次性使用。

  五、设立适当的阳性对照和阴性对照。阳性对照以能出现扩增条带的较低量的标准病原体核酸为宜，并注意交叉污染的可能性，每次反应都应有一管不加模板的试剂对照及相应不含有被扩增核酸的样品作阴性对照。

  六、选择质量好的 Eppendorf管，以避免样本外溢及外来核酸的进入，打开离心管前应先离心，将管壁及管盖上的液体甩至管底部，开管动作要轻,以防管内液体溅出。